Інструкція

для медичного застосування

Дисків з антибіотиками для визначення чутливості

мікроорганізмів до лікарських засобів

Загальна характеристика

 Диски з антибіотиками використовуються для визначення чутливості до антибіотиків збудників інфекційних захворювань, виділених з патологічного матеріалу хворих.

Диски виготовлені з картону, який наділений спеціальними властивостями та насичений стандартними розчинами антибіотиків визначеної концентрації. Вміст антибіотика у диску, який вказаний на етикетці, відповідає рекомендаціям ВООЗ. Для запобігання насиченню вологою дисків у флакони поміщені: вата гігроскопічна та силікагель технічний індикаторний синього кольору.

Методика визначення чутливості

1. Поживне середовище

Для визначення чутливості рекомендовано використовувати поживний агар для визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків ( середовище АГВ) із вмістом триптичного гідролізату кільки 25,0 г/л, крохмалю розчинного 0,5 г/л, натрію фосфорнокислого двозаміщенного 1,0 г/л, агару 13,5 г/л при рН-7,4+0,2.

Для гемофільних мікроорганізмів, які не ростуть на звичайному поживному середовищі, у вказане вище поживне середовище добавляють 5 % дефібрінованої або гемолізованої крові.

2. Приготування чашок

Розплавлене середовище розливають по 15 мл у стерильні чашки Петрі, діаметром 100 мм, розташованих на горизонтальній поверхні. Перед зараженням поверхню застиглого середовища підсушують протягом 30- 40 хвилин.

3. Приготування інокулята та нанесення його на поверхню агарового середовища

Інокулят готують із чистої 18-20-годинної культури бактерій, які виросли на поверхні щільного поживного середовища. Для цього 5-10 ізольованих колоній суспензують у рідкому поживному середовищі або в ізотонічному розчині хлориду натрію. Як інокулят можна використовувати чисту 18- 20 годинну бульйонну культуру. Суспензію або бульйонну культуру розводять ізотонічним розчином хлориду натрію до каламутності оптичного стандарту на 10 ОД, а потім отриману суміш розводять ще повторно у 20 разів.

Інокулят, загальним об”ємом 1 мл, наносять на поверхню агарового середовища і рівномірно розподіляють шляхом її похитування. Залишок рідини видаляють піпеткою. Напіввідкриті чашки Петрі підсушують при кімнатній температурі протягом 10- 15 хвилин.

 4. Накладання дисків

Диски за допомогою пінцета розміщують на поверхні зараженого поживного середовища на однаковій відстані один від одного та приблизно на відстані 2 см від краю чашки. На одній чашці Петрі необхідно розміщувати не більше 5 дисків.

5. Інкубація чашок

Чашки інкубують у термостаті протягом 18- 20 годин, при t 35-37 ^оС, з перевернутим до- гори дном.

6. Облік результатів

За допомогою лінійки або вимірювача (кронциркуля, штангенциркуля) проводять вимір діаметра зони затримки росту довкола дисків, включаючи при цьому діаметр самих дисків з точністю до 1 мм. При не різко окреслених краях зон або зонах з подвійними контурами необхідно проводити вимір зони по найбільш чіткому контуру.

7. Інтерпретація отриманих результатів

Оцінка результатів проводиться згідно з табл.1, яка містить граничні розміри зон затримки росту для нечутливих, помірно чутливих та чутливих штамів.

Отримані результати (за діаметром зони затримки росту) порівнюють з граничними значеннями в табл.1 після чого розподіляють штами, що вивчаються, на три категорії чутливості.

8. Контроль відтворення та точності отриманих результатів

Для контролю відтворення та точності процедури визначення чутливості мікроорганізмів до лікарських засобів необхідно на кожну постановку теста паралельно з випробованими штамами використовувати еталонні штами: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853).

Діаметри затримки зон росту еталонних штамів повинні відповідати даним, викладеним у табл. 2.

Еталонні штами використовують для перевірки якості дисків, поживного середовища та правильності методики постановки теста.

Умови та термін зберігання. Зберігати у сухому, захищеному від світла місці, при температурі від +4 до +8 ^оС. Термін придатності 1 рік.